膳食纖維檢測是指碳水化合物及其相類似物質(zhì)的總和,包括多糖、寡糖、木質(zhì)素以及相關的植物物質(zhì)。主要有纖維素、半纖維素、果膠及親水膠體物質(zhì),如樹膠、海藻多糖等組分;另外還包括植物細胞壁中所含有的木質(zhì)素;不被人體消化酶所分解的物質(zhì),如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纖維素、黏質(zhì)、寡糖以及少量相關成分,如蠟紙、角質(zhì)、軟木脂等。
膳食纖維檢測的操作方法
1、試樣制備試樣處理根據(jù)水分含量、脂肪含量和糖含量進行適當?shù)奶幚砑案稍?,并粉碎、混勻過篩。
①脂肪含量<10%的試樣:若試樣水分含量較低(<10%),取試樣直接反復粉碎,至*過篩?;靹?,待用。
若試樣水分含量較高(≥10%),試樣混勻后,稱取適量試樣(mc,不少于50g),置于(70±1)℃真空干燥箱內(nèi)干燥至恒重。將干燥后試樣轉(zhuǎn)至干燥器中,待試樣溫度降到室溫后稱量(MD)。根據(jù)干燥前后試樣質(zhì)量,計算試樣質(zhì)量損失因子(f)。干燥后試樣反復粉碎至*過篩,置于干燥器中待用。
②脂肪含量≥10%的試樣:試樣需經(jīng)脫脂處理。稱取適量試樣(mc,不少于50g),置于漏斗中,按每克試樣25mL的比例加入石油醚進行沖洗,連續(xù)3次。脫脂后將試樣混勻再進行干燥、稱量(MD),記錄脫脂、干燥后試樣質(zhì)量損失因子(f)。試樣反復粉碎至*過篩,置于干燥器中待用。
?、厶呛?ge;5%的試樣:試樣需經(jīng)脫糖處理。稱取適量試樣(mc,不少于50g),置于漏斗中,按每克試樣10mL的比例加入85%乙醇溶液進行沖洗,棄乙醇溶液,連續(xù)3次。脫糖后將試樣置于40℃烘箱內(nèi)干燥過夜,稱量(MD),記錄脫糖、干燥后試樣質(zhì)量損失因子(f)。干燥后試樣反復粉碎至*過篩,置于干燥器中待用。
2、酶解準確稱取雙份試樣(m),約1g(至0.1mg),雙份試樣質(zhì)量≤0.005g。將試樣轉(zhuǎn)置于400~600mL高腳燒杯中,加入0.05mol/LMES-TRIS緩沖液40mL,用磁力攪拌直至試樣*分散在緩沖液中。同時制備兩個空白樣液與試樣液進行同步操作,用于校正試劑對測定的影響。
膳食纖維檢測樣品分別用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶進行酶解消化以去除蛋白質(zhì)和可消化的淀粉??偵攀忱w維(TDF)是先酶解,然后用乙醇沉淀,再將沉淀物過濾,將TDF殘渣用乙醇和丙酮沖洗,干燥稱重。不溶性和可溶性膳食纖維(IDF和SDF)是酶解后將IDF過濾,過濾后的殘渣用熱水沖洗,經(jīng)干燥后稱重。SDF是將上述濾出液用4倍量的95%乙醇沉淀,然后再過濾,干燥,稱重。TDF、IDF和SDF量通過蛋白質(zhì)、灰分含量進行校正。